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QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (1000)

  • 商品编号:
    210215
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    ¥41896
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  • 商品名称:QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (1000)
  • 商品编号:210215
  • 品牌:Qiagen
  • 上架时间:2014-04-04
  • 商品毛重:1.000千克
  • 库存: 100 支
性能
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit提供方便的规格,可使用RNA模板进行高灵敏度和特异性的RT-PCR。试剂盒中包含优化的组分,可在同一反应混合液中进行逆转录和PCR扩增,完成"一步式"反应。独特的酶组合和专门研发的反应缓冲液确保在一个管中进行高效、高特异性的逆转录和PCR,无需优化(参见Highly specific RT-PCR using low amounts of template 和 Efficient detection of viral RNA)。试剂盒提供的新型的、双阳离子PCR缓冲液确保在宽退火温度范围内得到高产量的特异性PCR产物(参见Influence of annealing temperature on specificity)。使用Q-Solution可提高不理想的RT-PCR的表现,这种独特的辅助剂可帮助逆转录并高效扩增具有高GC含量和复杂二级结构的模板(参见RT-PCR of GC-rich template)。
原理

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可对多种RNA模板进行简单、灵敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有为逆转录和PCR反应特别设计的酶。独特组合的Omniscript和Sensiscrip逆转录酶对RNA模板有高度亲和性,确保RNA逆转录的灵敏度达到1 pg到2 µg。逆转录完成后,升温至95°C,15分钟,活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。这种方法可减少引物二聚体等非特异性扩增产物的生成,并减少背景的影响,确保RT-PCR的高灵敏度和可重复性(参见Highly specific RT-PCR using low amounts of template 和 Efficient detection of viral RNA)。

退火温度范围宽

引物的最佳退火温度取决于碱基对的组成(如A、T、G、C核苷酸的比例)、引物的浓度和反应的离子环境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+,使用该缓冲液可在很宽的温度范围内增加特异性PCR产物的产量(参见Increased specific primer annealing)。其原理是破坏非特异性结合的引物对,提供更加可靠的反应环境,减少繁琐的温度优化过程。相反,如使用仅含K+的PCR或一步式RT-PCR缓冲液,PCR最佳退火温度的范围较窄,可靠性较差,参见Influence of annealing temperature on specificity

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为提高逆转录和PCR扩增的效率而设计。该缓冲液含有新型辅助剂,可防止逆转录酶对PCR扩增的抑制,而这是一步式RT-PCR中常见的问题。该缓冲液确保在较大的温度范围和Mg2+浓度范围内,引物与模板特异性结合,可对多种RNA模板进行高效的RT-PCR扩增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution,这是可修饰核酸熔解行为的新型辅助剂。Q-Solution可促进高GC含量或含较多二级结构的模板的逆转录和扩增(参见RT-PCR of GC-rich template)。 使用Q-Solution可简化复杂模板RT-PCR的优化过程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有试剂,可进行快速、简便的RT-PCR,用于多种灵敏的应用(见表)。

可靠的一步式RT-PCR结果
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 组分 特点
HotStarTaq DNA Polymerase 高度特异性产物
Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases RNA初始量的范围大 (1 pg–2 µg) 
高灵敏度 
 
OneStep RT-PCR Buffer 无需优化 
反转录酶不会抑制PCR 
抑制RNases 
 
Q-Solution 促进GC含量高的模板的扩增

 

操作流程

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、简单的进行RT-PCR反应体系构建。无论是何种应用,即无论是病毒检测、分子诊断研究还是基因表达,您只需将所有试剂在一个离心管中混合即可开始PCR扩增(参见OneStep RT-PCR procedure)。反应混合液含有逆转录和PCR反应所需的所有试剂,无需添加其他试剂即可开始反应(参见下表)。

应用

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit适用于RT-PCR分析,包括:

  • 病毒检测
  • 单细胞RT-PCR
  • 基因表达分析
服务承诺:
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